光學(xué)顯微鏡成像受到多種因素的影響,這些因素可以歸納為以下幾個方面:
一、被檢物體準備
切片厚度:切片厚度是否適中非常關(guān)鍵,過厚的切片會導(dǎo)致光線穿透困難,影響成像清晰度。
蓋玻片質(zhì)量:蓋玻片是否符合國家標準,其平整度、清潔度等都會影響成像質(zhì)量。
二、顯微鏡硬件因素
物鏡檔次:物鏡按檔次可分為多個級別,常用的為平場消色差物鏡。物鏡檔次低會導(dǎo)致成像質(zhì)量下降,因此建議選擇較G檔次的物鏡。
聚光鏡孔徑光欄:聚光鏡孔徑光欄應(yīng)與物鏡的數(shù)值孔徑相匹配,以獲得Z佳的圖像分辨率。
調(diào)焦系統(tǒng):調(diào)焦系統(tǒng)的精度對成像質(zhì)量有重要影響。熟練的操作者能快速找到圖像并聚焦,提高工作效率。
載物臺:載物臺的精度和穩(wěn)定性影響成像質(zhì)量。雙層機械移動平臺通常具有較好的精度和穩(wěn)定性。
非球面集光鏡:能提供非常均勻的照明光線,使得觀察到的顯微圖像襯度J佳。
三、光學(xué)相差
色差:多色光為光源時,由于各種光的波長不同,在通過透鏡時的折射率也不同,導(dǎo)致物方一個點在像方形成色斑,影響成像清晰度。
球差:軸上點的單色相差,由于透鏡的球形表面造成,使得一個點成像后不是亮點,而是一個中心亮、邊緣模糊的亮斑。
慧差:軸外點的單色相差,導(dǎo)致光點的像形成逗點狀,影響成像質(zhì)量。
像散:軸外點單色相差,使物點在成像后變成兩個分別且相互垂直的短線,形成橢圓形斑點。
場曲:透鏡存在場曲時,整個光束的交點不與理想像點重合,導(dǎo)致整個像平面是一個曲面,影響觀察。
四、其他因素
數(shù)值孔徑(NA):描述了透鏡收光錐角的大小,是判斷物鏡性能的關(guān)鍵指標,影響分辨率、焦點深度、鏡像亮度等。
分辨率:能被顯微鏡清晰區(qū)分的兩個物點間的Z小距離,是顯微鏡能否看清楚小物體或細節(jié)的關(guān)鍵。
光通量:物鏡決定進入系統(tǒng)的光通量,影響視野亮度和成像質(zhì)量。
使用環(huán)境:顯微鏡應(yīng)放置在干燥清潔的房間,避免光學(xué)部件發(fā)霉、金屬部分生銹以及粘滿灰塵。同時,避免與腐蝕性化學(xué)品接觸,防止損壞。
綜上所述,光學(xué)顯微鏡成像受到被檢物體準備、顯微鏡硬件因素、光學(xué)相差以及其他多種因素的影響。在實際使用中,需要綜合考慮這些因素,以獲得高質(zhì)量的成像效果。