什么叫相差顯微鏡？

(一)相差顯微鏡原理和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

光波有振幅（亮度）、波長(zhǎng)（顏色）及相位(指在某一時(shí)間上光的波動(dòng)所能達(dá)到的位置)的不同。當(dāng)光通過(guò)物體時(shí)，如波長(zhǎng)和振幅發(fā)生變化，人們的眼睛才能觀察到，這就是普通顯微鏡下能夠觀察到染色標(biāo)本的道理。而活細(xì)胞和未經(jīng)染色的生物標(biāo)本，因細(xì)胞各部微細(xì)結(jié)構(gòu)的折射率和厚度略有不同，光波通過(guò)時(shí)，波長(zhǎng)和振幅并不發(fā)生變化，僅相位有變化(相應(yīng)發(fā)生的差異即相差)，而這種微小的變化，人眼是無(wú)法加以鑒別的，故在普通顯微鏡下難以觀察到。能夠改變直射光或衍射光的相位，并且利用光的衍射和干涉現(xiàn)象，把相差變成振幅差(明暗差)，同時(shí)它還吸收部分直射光線(xiàn)，以增大其明暗的反差。因此可用以觀察活細(xì)胞或未染色標(biāo)本。相差顯微鏡與普通顯微鏡的主要不同之處是：用環(huán)狀光闌代替可變光闌，用帶相板的物鏡(通常標(biāo)有PH的標(biāo)記)代替普通物鏡，并帶有一個(gè)合軸用的望遠(yuǎn)鏡。環(huán)狀光闌是由大小不同的環(huán)狀孔形成 的光闌，它們的直徑和孔寬是與不同的物鏡相匹配的。其作用是將直射光所形成的像從一些衍射旁像中分出來(lái)。相板安裝在物鏡的后焦面處，相板裝有吸收光線(xiàn)的吸收膜和推遲相位的相位膜。它除能推遲直射光線(xiàn)或衍射光的相位以外，還有吸收光使亮度發(fā)生變化的作用。調(diào)軸望遠(yuǎn)鏡是用來(lái)進(jìn)行合軸調(diào)節(jié)的。相差顯微鏡在使用時(shí)，聚光鏡下面環(huán)狀光闌的中心與物鏡光軸要完全在一直線(xiàn)上，必需調(diào)節(jié)光闌的亮環(huán)和相板的環(huán)狀圈重合對(duì)齊，才能發(fā)揮相差顯微鏡的效能。否則直射光或衍射光的光路紊亂，應(yīng)被吸收的光不能吸收，該推遲相位的光波不能推遲，就失去了相差顯微鏡的作用。

(二)相差顯微鏡使用方法：相差裝置為多功能系列顯微鏡中的附屬裝置，與普通顯微鏡配合使用。

1．相差裝置的調(diào)換安裝   

卸下普通顯微鏡使用的聚光器，將環(huán)狀光闌裝在聚光器支架上，把綠色濾光片放在上面，它可吸收紅色和藍(lán)色光，使波長(zhǎng)范圍小的單色光線(xiàn)進(jìn)行照明，并有吸熱作用，能使相差觀察獲得良好的效果。再?gòu)霓D(zhuǎn)換器上旋下普通物鏡，換上相差物鏡。

2．調(diào)焦   

打開(kāi)光源，旋轉(zhuǎn)集光器轉(zhuǎn)盤(pán)，將“o”對(duì)準(zhǔn)標(biāo)示孔，使普通聚光器部分進(jìn)入光路。先使用低倍相差物鏡，按普通顯微鏡操作方法進(jìn)行對(duì)光和調(diào)焦。旋轉(zhuǎn)環(huán)狀光闌，使光闌的直徑和孔寬與所使用的相差物鏡相適應(yīng)，如相差物鏡為40X時(shí)應(yīng)用X40標(biāo)示孔的光闌。

3．合軸調(diào)整   

拔出目鏡，插入合軸望遠(yuǎn)鏡，一邊從望遠(yuǎn)鏡內(nèi)觀察，并用左手固定其外筒；一邊用右手轉(zhuǎn)動(dòng)望遠(yuǎn)鏡內(nèi)筒使其下降，當(dāng)對(duì)準(zhǔn)焦點(diǎn)就能看到環(huán)狀光闌的亮環(huán)和相板的黑環(huán)，此時(shí)可將望遠(yuǎn)鏡固定住。再升降集光器并調(diào)節(jié)其下的螺旋使亮環(huán)的大小與黑環(huán)一致，然后左右前后調(diào)節(jié)環(huán)狀光闌聚光器上的調(diào)節(jié)鈕，使兩環(huán)完全重合，如亮環(huán)比黑環(huán)小而位于內(nèi)側(cè)時(shí)，應(yīng)降低集光器使亮環(huán)放大；反之，則應(yīng)升高聚光器，使亮環(huán)縮小。如若升到*高限度仍不能完全重合，則可能是載玻片過(guò)厚之故，應(yīng)更換。合軸調(diào)整完畢，抽出望遠(yuǎn)鏡，換回目鏡，按常規(guī)要領(lǐng)進(jìn)行觀察。在更換不同倍率的相差物鏡時(shí)，每一次都要使用相匹配的環(huán)狀光闌和重新合軸調(diào)整。使用油鏡時(shí)，集光器上透鏡表面與載玻片之間要同時(shí)加上香柏油。