[導(dǎo)讀]一次給進(jìn)修生講課，我問(wèn)：“你們會(huì)使用顯微鏡嗎?”，聽(tīng)著認(rèn)識(shí)好笑!曹老師問(wèn)這么幼稚的問(wèn)題!全場(chǎng)的舉手，一致回答“會(huì)”。我又問(wèn)：“誰(shuí)懂得合軸調(diào)節(jié)?”一時(shí)啞口無(wú)言。我再問(wèn)“哪一位能夠說(shuō)一說(shuō)什么是齊焦精度?等高轉(zhuǎn)換?”也是沉默不語(yǔ)。我問(wèn)：“有沒(méi)有看顯微鏡后頭腦發(fā)暈?模糊不清?”大家反應(yīng)活躍，這個(gè)說(shuō)：“我曾經(jīng)有過(guò)!那個(gè)說(shuō)就是不明白怎么回事?”議論紛紛。等大家安靜下來(lái)，開(kāi)始了我的講課內(nèi)容。

一個(gè)戰(zhàn)士對(duì)于手中的武器一定了如指掌，才能發(fā)揮*大效果。一個(gè)醫(yī)療戰(zhàn)線(xiàn)的偵察兵一定要的顯微鏡了如指掌，才能發(fā)揮*大效能。而我們對(duì)習(xí)以為常的手中武器是不是如此，希望盡量為大家補(bǔ)課，已經(jīng)明白的深入討論其中的奧秘，沒(méi)有清楚的咱們一起溫故知新。

資料來(lái)源：曹興午.醫(yī)用顯微鏡與顯微攝影.李滌生，陳宏礎(chǔ)，石自明.臨床檢驗(yàn)學(xué)(高等醫(yī)學(xué)院校檢驗(yàn)系教材).人民衛(wèi)生出版社.1987,245-280.

一、 顯微鏡的轉(zhuǎn)換盤(pán)的精度考量，是以定位精度和齊焦精度為標(biāo)準(zhǔn)

1.定位精度：是指物鏡鏡頭處于工作狀態(tài)時(shí)，轉(zhuǎn)化器(轉(zhuǎn)化盤(pán))必須明確與穩(wěn)定，它的視野中心對(duì)于其他物鏡，處于同樣工作狀態(tài)時(shí)，視野中心的偏移量而言，一定是一致的。換句話(huà)說(shuō)，就是轉(zhuǎn)換哪一個(gè)鏡頭，都應(yīng)該在一個(gè)相同的位置，不能夠有偏移。

定位精度調(diào)整與觀(guān)察：物鏡在轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換以后，用不同的放大倍率的物鏡，觀(guān)察物鏡的光軸的不重合?？上扔?0×物鏡調(diào)焦后，以其中心為基準(zhǔn)，再轉(zhuǎn)換到40×物鏡時(shí)，中心移位不得超過(guò)視場(chǎng)的半徑的2/3，以40×物鏡為基準(zhǔn)，轉(zhuǎn)換到100×物鏡時(shí)，中心位移不得超過(guò)視場(chǎng)半徑的3/4。顯微鏡的精密度越高，位移越小，**研究顯微鏡甚至是一致，這是考量顯微鏡優(yōu)劣的標(biāo)準(zhǔn)之一，更是考量使用者的水平標(biāo)準(zhǔn)。為什么?這么說(shuō)?我們80%的使用者，都是以手?jǐn)Q著鏡頭進(jìn)行倍率的轉(zhuǎn)換，長(zhǎng)期多次、如此操作，導(dǎo)致鏡頭的銜接絲扣損傷和松動(dòng)，破壞了其精度造成的后果。正確使用是以手持轉(zhuǎn)換盤(pán)(上面刻有條紋顯示)轉(zhuǎn)換鏡頭，保持顯微鏡的定位精度。

2.齊焦精度：指的是一個(gè)顯微鏡物鏡鏡頭，調(diào)節(jié)在一個(gè)工作的位置后，再轉(zhuǎn)換另外一個(gè)鏡頭的時(shí)候，應(yīng)該在不重新調(diào)節(jié)焦距的情況下，就可以看到物象。例如從低倍轉(zhuǎn)換到高倍鏡頭觀(guān)察時(shí)，仍然可以看到標(biāo)本的輪廓，其精確度在0.03毫米范圍內(nèi)，允許調(diào)焦就可以觀(guān)察清楚，否則為齊焦精度不夠。油鏡的觀(guān)察可以與其鏡頭不必齊焦，因?yàn)榻橘|(zhì)不同，一個(gè)是干系統(tǒng)，一個(gè)是油浸系統(tǒng)。但是注意，在油鏡轉(zhuǎn)換時(shí)不要使鏡頭碰到蓋片，如果碰到的時(shí)候，說(shuō)明蓋片厚度超過(guò)了規(guī)定的厚度，屬于不合格產(chǎn)品，其蓋片厚度要求，在油鏡頭上明確書(shū)寫(xiě)。

3.物鏡的設(shè)計(jì)與轉(zhuǎn)換盤(pán)的銜接、誤差是以等高轉(zhuǎn)換考量：更是考量使用者操作正確與否的一個(gè)指標(biāo)。

等高轉(zhuǎn)換：是指從低倍鏡頭轉(zhuǎn)換到高倍鏡頭的時(shí)候，如果物鏡鏡頭是顯微鏡的原配，所有載物片、蓋玻片又完全符合標(biāo)準(zhǔn)要求，在齊焦精度無(wú)誤的情況下，一般都可以進(jìn)行自由的“等高轉(zhuǎn)換”。即利用轉(zhuǎn)換器，直接將高倍鏡頭旋入光軸，只要將微動(dòng)調(diào)節(jié)稍微調(diào)節(jié)，就可以清晰觀(guān)察到物象。如果達(dá)不到如此狀態(tài)，就需要檢查蓋玻片、載玻片的厚度是不是超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)，這兩項(xiàng)都沒(méi)有問(wèn)題，就要考慮顯微鏡的設(shè)計(jì)問(wèn)題，必須與廠(chǎng)家聯(lián)系解決。筆者在中日醫(yī)院在建院驗(yàn)收130臺(tái)日本顯微鏡就發(fā)現(xiàn)類(lèi)似問(wèn)題。如果使用者在使用顯微鏡時(shí)候，在轉(zhuǎn)換鏡頭時(shí)，不是手持轉(zhuǎn)換盤(pán)轉(zhuǎn)換，常常是手持物鏡鏡頭，進(jìn)行觀(guān)察倍率的更換，如低倍鏡轉(zhuǎn)換高倍鏡，就扭住鏡頭進(jìn)行轉(zhuǎn)換，實(shí)際是一種常見(jiàn)的操作錯(cuò)誤，長(zhǎng)期如此使用導(dǎo)致鏡頭的絲扣與轉(zhuǎn)換盤(pán)吻合精度出現(xiàn)誤差，使得等高轉(zhuǎn)換出現(xiàn)偏移，不僅影響觀(guān)察更造成顯微鏡無(wú)法使用。筆者曾經(jīng)就這問(wèn)題對(duì)使用者進(jìn)行調(diào)查，約90%都是如此使用，這樣就減少了顯微鏡的服務(wù)年限。筆者自己購(gòu)置的一臺(tái)顯微鏡，退休后仍然每天使用，經(jīng)30年后，顯微鏡仍然發(fā)揮*大效應(yīng)繼續(xù)工作。

4、微動(dòng)調(diào)節(jié)聚焦分度計(jì)算：我們每天離不開(kāi)使用顯微鏡，看標(biāo)本使用微調(diào)也習(xí)以為常，從來(lái)不考慮分度計(jì)算。微調(diào)的總調(diào)節(jié)距離一般為1.8~3毫米，經(jīng)常為2毫米(在微調(diào)手輪上，可以看到的刻度)，由微動(dòng)手輪控制，旋轉(zhuǎn)手輪，光學(xué)系統(tǒng)能夠非常緩慢的移動(dòng)。如上升或是下降調(diào)節(jié)的距離為2毫米，如果手輪轉(zhuǎn)動(dòng)15周，每周50分度，那么每調(diào)節(jié)一個(gè)分度，光學(xué)系統(tǒng)的上升或是下降的距離為：2毫米÷(15×50)=0.0027毫米=2.7μm。這樣就可以利用微調(diào)分度測(cè)量組織標(biāo)本的厚度。

5、微調(diào)的誤差：微調(diào)在調(diào)焦的范圍內(nèi)，在轉(zhuǎn)動(dòng)手輪時(shí)，物象不應(yīng)該有搖動(dòng)或是晃動(dòng)現(xiàn)象，即使存在的時(shí)候，*大搖擺角度不>1;用10×物鏡觀(guān)察時(shí)，在景深的范圍內(nèi)，旋轉(zhuǎn)微調(diào)手輪，物體的平面位置位移在0.05毫米;微調(diào)在上升與下降，手輪轉(zhuǎn)動(dòng)，應(yīng)允許連續(xù)均勻動(dòng)作，不應(yīng)該產(chǎn)生滯留、停頓或是跳動(dòng)發(fā)生。如果是發(fā)生說(shuō)明顯微鏡出現(xiàn)了故障，在齒輪部位，如果新購(gòu)入的顯微鏡說(shuō)明精度誤差大，屬于不合格產(chǎn)品。

6、合軸調(diào)節(jié)即中心調(diào)節(jié)：是考量操作者對(duì)顯微鏡知識(shí)了解和會(huì)不會(huì)操作的一個(gè)重要指標(biāo);是發(fā)揮顯微鏡*大性能的一個(gè)重要因素;也是驗(yàn)收一臺(tái)顯微鏡是否合格的一項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)。

合軸調(diào)節(jié)：使目鏡、物鏡和聚光器的主光軸和可變光闌的中心，必須完全重合在一條直線(xiàn)上，稱(chēng)為光學(xué)合軸。如果光軸不吻合或不正，會(huì)增大物象的象差和彗差，導(dǎo)致觀(guān)察物體分辨率降低和清晰度下降。

合軸調(diào)節(jié)主要是調(diào)節(jié)聚光器的位置，因?yàn)槟跨R與物鏡在出廠(chǎng)時(shí)就已經(jīng)調(diào)整好了。有些顯微鏡上的聚光器上，沒(méi)有光軸調(diào)節(jié)螺絲(老式顯微鏡)，可以扭動(dòng)聚光器進(jìn)行光軸調(diào)節(jié)。現(xiàn)代顯微鏡在聚光器的支架上，兩旁都有一個(gè)光軸校正螺絲，左右手，擰著這兩個(gè)螺絲，可以進(jìn)行合軸調(diào)節(jié)，使聚光器、物鏡、目鏡調(diào)整在一條光軸上，進(jìn)行合軸調(diào)節(jié)。另外，有的顯微鏡在聚光器的支架上，有三個(gè)相隔120度角頂絲，其中一個(gè)裝有彈簧的可以伸縮，另外兩個(gè)為螺絲，可以旋動(dòng)，在調(diào)整三個(gè)螺絲，使聚光器在水平面移動(dòng)位置，從而進(jìn)行光軸調(diào)整，進(jìn)行合軸。如果合軸不好或是合軸不上，就需要檢查是否光柵的固定螺絲松動(dòng)，轉(zhuǎn)換器的定位失靈。

調(diào)整方法：將標(biāo)本放在載物臺(tái)上，用10×物鏡進(jìn)行對(duì)焦。將聚光器光柵全部打開(kāi)，調(diào)整分光鏡的角度，使視場(chǎng)的光亮度*亮，將光柵關(guān)閉到*小，上下移動(dòng)聚光器，將視野收縮聚焦對(duì)準(zhǔn)標(biāo)本上。如果視野的收縮象不在正中間，即可調(diào)節(jié)聚光器的光軸校正螺絲使匹配同心為止。將物鏡轉(zhuǎn)換到 40×，調(diào)節(jié)光柵的大小，使視野里的原來(lái)收縮象和視野幾乎相等。如若仍然處于偏心時(shí)，就需要擰動(dòng)聚光器的螺絲進(jìn)行正確合軸。另外，也可以使用拔掉目鏡，從鏡筒上面直接觀(guān)察，將光柵關(guān)閉*小時(shí)，光柵孔的映像只有一個(gè)亮點(diǎn)，正好落在物鏡的中心，即可合格。如果不是，可調(diào)節(jié)下面聚光器調(diào)整，觀(guān)察光線(xiàn)偏移進(jìn)行調(diào)整。

說(shuō)明：1合軸調(diào)節(jié)使視野影像重合;2與調(diào)節(jié)聚光器光亮大小一致。

7、瞳孔距離調(diào)節(jié)：目前大多數(shù)醫(yī)院的顯微鏡都是雙目顯微鏡，大家在應(yīng)用時(shí)一定要先調(diào)節(jié)瞳孔距離。有的學(xué)生問(wèn)我：“曹老師，我看完了顯微鏡為什么頭痛?心里非常不舒服?”，我告訴他，“是由于你沒(méi)有調(diào)整好你的瞳孔距離導(dǎo)致的結(jié)果，我教你如何調(diào)整瞳孔距離!”

在顯微鏡的上都有調(diào)節(jié)裝置，因?yàn)槊總€(gè)觀(guān)察者的瞳孔距離都是不同的，為此，在使用時(shí)必須首先調(diào)整瞳孔距離。圖就像配置眼鏡時(shí)，必須給你測(cè)定瞳孔距離一樣，我們看顯微鏡一定要先調(diào)節(jié)瞳距。在兩個(gè)目鏡的中間的間隔是可以延長(zhǎng)平行線(xiàn)進(jìn)行調(diào)節(jié)，一般在目鏡支撐的鏡架上，刻有53~73的數(shù)字，是調(diào)整瞳距的標(biāo)記數(shù)字。在調(diào)節(jié)過(guò)程中，物象的象面位置有所變化，這個(gè)變化量有些顯微鏡可以自動(dòng)補(bǔ)償，大部分需要人工加以補(bǔ)償，即從上面所刻的標(biāo)尺數(shù)值上，讀出你的瞳孔距離的數(shù)值，然后轉(zhuǎn)動(dòng)右側(cè)目鏡的套筒，使其上面的讀數(shù)與瞳孔距離的數(shù)值一致，然后用右眼對(duì)好焦點(diǎn)找好物象，再旋轉(zhuǎn)左側(cè)目鏡套筒，使左右兩眼的物象重合，焦點(diǎn)一致。這樣調(diào)節(jié)后，不僅可以保證物鏡的齊焦精度，也可以使觀(guān)察者長(zhǎng)時(shí)間使用不會(huì)漂亮，更可以保護(hù)視力。