光學(xué)顯微鏡觀察方式中的暗視野觀察方法（Dark Field Observation）是一種特殊的顯微鏡觀察技術(shù)，它通過特殊的聚光鏡設(shè)計，使得照明光線不直接進(jìn)入物鏡，而是利用被檢物體反射或衍射的光線來形成圖像。以下是暗視野觀察方法的詳細(xì)介紹：

一、基本原理

暗視野觀察方法基于丁達(dá)爾（Tyndall）光學(xué)效應(yīng)的原理。當(dāng)一束光線透過黑暗的房間，從垂直于入射光的方向可以觀察到空氣里出現(xiàn)的一條光亮的灰塵“通路”，這就是丁達(dá)爾效應(yīng)。在暗視野顯微鏡中，聚光鏡中央有擋光片，使照明光線不直接進(jìn)入物鏡，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡，因此視野的背景是黑的，而物體的邊緣是亮的。

二、特點與優(yōu)勢

高分辨率：暗視野觀察的分辨率遠(yuǎn)高于明視野觀察，可達(dá)到0.02~0.004μm，因此也被稱為“超顯微術(shù)”。

高對比度：由于背景黑暗，被檢物體呈現(xiàn)明亮的像，因此對比度高，有助于觀察微小粒子或結(jié)構(gòu)。

無需染色：暗視野顯微鏡常用于觀察未染色的透明樣品，這些樣品在明視野下難以觀察清楚。

三、所需附件

暗視野觀察所需的特殊附件是暗視野聚光鏡。這個聚光鏡在普通聚光鏡的基礎(chǔ)上增加了擋光片，使光線斜射向被檢物體，而不直接通過被檢物體進(jìn)入物鏡。

四、操作步驟

安裝暗視野聚光鏡：將暗視野聚光器裝在顯微鏡的聚光器支架上。

調(diào)節(jié)光源：選用強(qiáng)的光源，但又要防止直射光線進(jìn)入物鏡，因此一般用顯微鏡燈照明。

加香柏油：在聚光器和標(biāo)本片之間加一滴香柏油，目的是不使照明光線在聚光鏡上面進(jìn)行全反射，從而達(dá)不到被檢物體。

對焦：升降集光器，將集光鏡的焦點對準(zhǔn)被檢物體，即以圓錐光束的頂點照射被檢物。

選擇物鏡：選用與聚光器相應(yīng)的物鏡，調(diào)節(jié)焦距，找到所需觀察的物像。

五、應(yīng)用范圍

暗視野顯微鏡常用于檢查病原體，如蒼白螺旋體，對早期梅毒的診斷有重要意義。此外，它還常用于觀察微小粒子、細(xì)胞運動以及未染色的透明樣品等。

六、注意事項

光源強(qiáng)度：暗視野觀察需要較強(qiáng)的光源才能觀察到樣品。

樣品準(zhǔn)備：玻片和蓋玻片B須無疵痕且無塵土，物鏡前透鏡也B須清潔無塵。

調(diào)節(jié)裝置：如果聚光器能水平移動并附有中心調(diào)節(jié)裝置，應(yīng)首先進(jìn)行中心調(diào)節(jié)，使聚光器的光軸與顯微鏡的光軸嚴(yán)格位于一直線上。

綜上所述，暗視野觀察方法是光學(xué)顯微鏡觀察方式中的一種重要技術(shù)，具有高分辨率、高對比度以及無需染色等優(yōu)點，廣泛應(yīng)用于病原體檢查、微小粒子觀察以及未染色透明樣品的觀察等領(lǐng)域。