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探究顯微鏡鏡象亮度以及視野大小的關(guān)鍵所在

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鏡象亮度是指顯微鏡中所看到的物象的亮暗程度。要看清楚物體的細(xì)節(jié),要求一定的亮度,也就是鏡象亮度,它和數(shù)值孔徑的平方成正比,和總放大倍數(shù)的平方成反比。在物鏡相同的情況下,使用5X的目鏡比使用10X的目鏡,鏡象亮度要大4倍,因此要想使鏡象亮度大,可使用大數(shù)值孔徑的物鏡,配以低放大倍數(shù)的目鏡。

顯微鏡.png

例如,使用40XN.A.0.65的物鏡配以5X的目鏡與使用10xN.A.0.25的物鏡配以20X的目鏡相比較,雖然總放大率都是200X,但是前者的鏡象亮度比后者大6.8倍。在實(shí)際觀察物體時(shí),并不是鏡象越亮越好,如果鏡象亮度太大,一通過標(biāo)本的光線太強(qiáng),會(huì)影響圖象的反差且不利于保護(hù)眼睛視力,所以要求將鏡象亮度調(diào)至適中,同時(shí)按不同標(biāo)本厚度加以調(diào)節(jié),對(duì)于厚的標(biāo)本可適當(dāng)增加亮度,反差好的標(biāo)本也可適當(dāng)增加亮度。

而所謂的視野指的是是視場(chǎng),說白了就是顯微鏡一次所能觀察到被檢標(biāo)本的范圍。一般來說顯微鏡的視野是很小的,它的大小與顯微鏡的總放大倍數(shù)成反比,總放大倍數(shù)越大時(shí),顯微鏡的視野越小。因此顯微鏡尤其是高放大倍數(shù)情況下,不可能在一個(gè)視野內(nèi)看到整個(gè)標(biāo)本,只能觀察到標(biāo)本的某個(gè)部位。假如需妥觀察標(biāo)本的其他部位時(shí),利用移動(dòng)器移動(dòng)標(biāo)本,使標(biāo)本中的各部分依次進(jìn)入視野內(nèi),輪流觀察。

光學(xué)顯微鏡的幾個(gè)主要性能之間有著一定的相互關(guān)系。能否看清楚小的物體或細(xì)節(jié),主要決定于物鏡的分辨率,即數(shù)值孔徑,并不決定于倍數(shù),認(rèn)為倍數(shù)越高看得越清楚的想法是不完全正確的。如果不增高分辨率。只是盡量增大倍數(shù),雖可以獲得更高的放大倍數(shù)的圖象,但是并不可能看出更多的細(xì)節(jié),這種放大叫做空的放大。為了充分利用物鏡的分辨率,顯微鏡的總放大倍數(shù)相應(yīng)也不能太小,否則本來可以看清楚的一些物體細(xì)節(jié),會(huì)由于總放大倍數(shù)過小,擠在一起而分辨不出。

同一物鏡分辨率隨放大倍數(shù)增大而提高,隨倍數(shù)減小而降低,例如數(shù)值孔徑為0.65的物鏡,在總放大倍數(shù)小于160倍時(shí),分辨率降為7微米,當(dāng)總放大倍數(shù)增至1600倍時(shí),分辨率提高到1.6微米以上。

顯微鏡合適的總放大倍數(shù)決定于物鏡數(shù)值孔徑N.A.值的500倍至1000倍,若N.A.值為0.6540倍物鏡,合適的總放大倍數(shù)應(yīng)為0.65x500倍。0.65x1000325倍至650倍。因此,為了達(dá)到合適的總放大倍數(shù)應(yīng)配合適當(dāng)倍數(shù)的目鏡。